重组蛋白A/G预装柱/填料

    rec-Protein A/G per Sepharose 4FF 比值：4.0-4.5mg rec-Protein A/G per ml Sepharose 4FF

    rec-Protein AG分子量：50.5 KDa

    每分子rec-Protein G可结合IgG位点数：6个（4个来自于蛋白A，2个来自于蛋白G）

    rec-Protein A可结合白蛋白位点数：无

    线性流速：300-500 cm/h

   耐压指数：≤0.3 MPa（填料）

l 注意事项
请在实验前仔细阅读本rProtein A预装柱使用说明。同时，将所要的所有试剂、耗材拿出置于室温，恢复至室温使用。

l  产品保存
产品储存于2-8℃，保质期两年。

l  rProtein A/G-Sepharose 4FF纯化IgG抗体步骤

以下方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体，不同来源的IgG与rProteinA/ G的结合能力不同，具体情况请参考表1。

1. 将血清或腹水样品（推荐上样量2 mL样品/mL柱）装入截留分子量3.5 KDa透析带中，于4 ℃冰箱中对1× PBS（pH 7.4）透析过夜；

2. 将rProtein A/G-Sepharose 4FF装柱固定好，用10倍柱体积1× PBS（pH 7.4）平衡层析柱，建议流速为1 mL/min；

3. 将透析好的样品从层析柱上端加入，建议流速为1 mL/min，为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样，重复2遍（或者是将样品1次性加入层析柱后置于摇床上，轻轻摇动，结合30 min）；

4. 样品结合后，用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱，建议流速为1 mL/min，勿让层析柱滴干；

5. 洗脱IgG，向层析柱上端加入洗脱液（100 mM甘氨酸，pH 2.7），用预先加有100 μL中和缓冲液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱体积，进行10 % SDS-PAGE电泳，确定IgG样品所在管，回收样品。

6. 加入5倍柱体积再生缓冲液（100 mM甘氨酸，pH 2.0），再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。 向层析柱加入10倍柱体积, 20% Ethanol，于4~8 ℃冰箱。

表1 rProtein A/G 与Ig结合能力情况

表2 rProtein A/G预装柱系列产品参数

重组蛋白A/G预装柱

重组蛋白A/G填料