1. 液体培养基贮存于4℃冰箱，避免光照，实验进行前放在37℃ 水槽中温热。

2. 液体培养基（加血清）存放期为六个月，期间glutamine可能会分解，若细胞生长不佳，可以再添加适量glutamine。

3. 粉末培养基配制(以1 升为例)：

3.1. 细胞培养基通常须添加10%血清，因此粉末培养基之配制体积为900 ml，pH为7.2-7.4。NaHCO3 为另外添加，若将NaHCO3粉末直接加入液体培养基中会造成pH之误差，或局部过碱。因此粉末培养基及NaHCO3粉末应分别溶解后才混合，然后用CO2气体调整pH，而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH)，因为氯离子对细胞生长可能有影响，且贮存时培养基的pH易发生改变。

3.2. 材料：

纯水（milli-Q水或二次至三次蒸馏水，水品质非常重要），粉末培养基，NaHCO3，电磁搅拌器，无菌血清瓶，0.1或0.2 mm无菌过滤膜，pH计，真空泵，CO2气体

3.3. 步骤：

　　3.3.1. 取粉末培养基溶于700 ml milli-Q水中，搅拌使其溶解。

　　3.3.2. 称取适量之NaHCO3粉末溶于200ml milli-Q水中，搅拌使其溶解，然后通入CO2 气体至饱和，约3-5分钟。

　　3.3.3. 将溶解且含饱和CO2之NaHCO3溶液加入溶解之液体培养基中混合。混后溶液之pH应为7.2-7.4，除非pH值偏差太大，否则不需用酸碱再调整之。若为太碱，可再通入CO2气体调整pH。培养基以真空帮浦通过过滤膜时，pH会升高0.1-0.2。

　　3.3.4. 以0.1或0.2 mm无菌过滤膜过滤灭菌，同时分装至无菌容器中，标示培养基种类、日期、瓶号等，贮存于4℃。(血清亦可加入培养基中一起过滤)

　　3.3.5. 配制之培养基配制须作生长试验与污染测试。

附-配制培养基之生长测试

材料：

　　MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004)

　　6-well TC plate (or 35 mm TC dish)

　　methanol

　　glacial acetic acid

　　10 % Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013)

步骤：

　　1. 以待测试培养基培养MDCKcell，接种MDCK 细胞于6-well plate (或35mm TC dish) 中，每个well 接种1 × 102 活细胞，同时作对照组实验。

　　2. 接种5～7 天后，在100 倍倒立显微镜作观察细胞群落之生长，待细胞群落大到可以肉眼观察，而群落间不互相接触时即可。

　　3. 去除培养基，加入1 mlCarnoy’s 固定液(甲醇：冰醋酸﹦ 3:1)，室温下静置10 min。

　　4. 去除固定液，水洗二次。

　　5. 加入1 ml 10 %Giemsa solution，，室温下静置染色2-3min。

　　6. 去除染液，水洗二次。

　　7. 以肉眼计数群落数，并比较之，若新配制或新批号的培养基对细胞生长不佳，则丢弃之。

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